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進(jìn)入掃描電鏡之前的樣品要經(jīng)過哪些處理流程

日期:2022-08-19

 進(jìn)入掃描電鏡之前的樣品要經(jīng)過哪些處理流程?下面澤攸科技小編為您介紹。掃描電鏡一種新型的電子光學(xué)儀器。它具有制樣簡單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點(diǎn)。數(shù)十年來,掃描電鏡已廣泛地應(yīng)用在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、冶金學(xué)等學(xué)科的領(lǐng)域中,促進(jìn)了各有關(guān)學(xué)科的發(fā)展。

  在進(jìn)行掃描電鏡觀察前,要對(duì)樣品作相應(yīng)的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是:盡可能使樣品的表面結(jié)構(gòu)保存好,沒有變形和污染,樣品干燥并且有良好導(dǎo)電性能。

  樣品的初步處理

  (一) 取材

  掃描電鏡來說,樣品可以稍大些,面積可達(dá)8mm×8mm,厚度可達(dá)5mm。對(duì)于掃描電鏡易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。

  (二) 樣品的清洗

  用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會(huì)遮蓋樣品的表面結(jié)構(gòu),影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。

  (三) 固定

  固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長。也可用快速冷凍固定。

  (四) 脫水

  樣品經(jīng)漂洗后用逐級(jí)增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進(jìn)入中間液,一般用醋酸異戊酯間液。

  樣品的干燥

  掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進(jìn)行。無論是水或脫水溶液,在高真空中都會(huì)產(chǎn)生劇烈地汽化,不僅影響真空度、污染樣品,還會(huì)破壞樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。因此,樣品在用電鏡觀察之前要進(jìn)行干燥。干燥的方法有以下幾種:

  (一) 空氣干燥法

  空氣干燥法又稱自然干燥法,就是將經(jīng)過脫水的樣品,讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發(fā)干燥。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是簡便易行和節(jié)省時(shí)間;它的主要缺點(diǎn)是在干燥過程中,組織會(huì)由于脫水劑揮發(fā)時(shí)表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此,該方法一般只適用于表面較為堅(jiān)硬的樣品。

  (二)臨界點(diǎn)干燥法

  臨界點(diǎn)干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)時(shí),其表面張力等于零的特性,使樣品的液體完全汽化,并以氣體方式排掉,來達(dá)到完全干燥的目的。這樣就可以避免表面張力的影響,較好地保存樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。此法操作較為方便,所用的時(shí)間也不算長,一般約2~3小時(shí)即可完成,所以是常用的干燥方法。

  (三) 冷凍干燥法

  冷凍干燥法是將經(jīng)過冷凍的樣品置于高真空中,通過升華除去樣品中的水分或脫水劑的過程。冷凍干燥的基礎(chǔ)是冰從樣品中升華,即水分從固態(tài)直接轉(zhuǎn)化為氣態(tài),不經(jīng)過中間的液態(tài),不存在氣相和液相之間的表面張力對(duì)樣品的作用,從而減輕在干燥過程中對(duì)樣品的損傷。

  樣品的導(dǎo)電處理

  生物樣品經(jīng)過脫水、干燥處理后,其表面不帶電,導(dǎo)電性能也差。用掃描電鏡觀察時(shí),當(dāng)入射電子束打到樣品上,會(huì)在樣品表面產(chǎn)生電荷的積累,形成充電和放電效應(yīng),影響對(duì)圖象的觀察和拍照記錄。因此在觀察之前要進(jìn)行導(dǎo)電處理,使樣品表面導(dǎo)電。常用的導(dǎo)電方法有以下幾種:

  (一) 金屬鍍膜法

  金屬鍍膜法是采用特殊裝置將電阻率小的金屬,如金、鉑、鈀等蒸發(fā)后覆蓋在樣品表面的方法。樣品鍍以金屬膜后,不僅可以防止充電、放電效應(yīng),還可以減少電子束對(duì)樣品的損傷作用,增加二次電子的產(chǎn)生率,獲得良好的圖象。

  (二) 組織導(dǎo)電法

  用金屬鍍膜法使樣品表面導(dǎo)電,需要特殊的設(shè)備,操作比較復(fù)雜,同時(shí)對(duì)樣品有一定程度的損傷。為了克服這些不足,有人采用組織導(dǎo)電法(又稱導(dǎo)電染色法),即利用某些金屬 溶液對(duì)生物樣品中的蛋白質(zhì)?脂類和醣類等成分的結(jié)合作用,使樣品表面離子化或產(chǎn)生導(dǎo)電性能好的金屬鹽類化合物,從而提高樣品耐受電子束轟擊的能力和導(dǎo)電率。


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作者:澤攸科技


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