掃描電子顯微鏡生物樣品制備
日期:2023-04-24
掃描電子顯微鏡(SEM)在生物學(xué)中被廣泛應(yīng)用于生物材料的形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的研究。下面是一般的生物樣品制備步驟:
1.固定樣品:選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌?duì)生物樣品進(jìn)行固定,以保持其形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。 常用的固定劑有戊二醛、縮聚磷酸、冷凍、脫水等。
2.取樣:將固定后的樣品用刀片切成適當(dāng)大小的薄片,以便放入掃描電子顯微鏡觀察。在取樣的過(guò)程中需要避免樣品的過(guò)度壓縮、撕裂等影響樣品結(jié)構(gòu)的損傷。
3.冷凍破裂:這是一種常見的生物樣品制備方法,特別適用于觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。樣品在液氮中快速冷凍,然后在真空中破裂,從而得到內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)。這種方法可以很好地保持生物樣品的原始狀態(tài),是研究生物超微結(jié)構(gòu)的重要手段之一。
4.真空干燥:將樣品放入真空干燥器中,用低溫下的真空吸收水分,然后用金屬蒸發(fā)器蒸發(fā)金屬鍍膜,以使樣品表面導(dǎo)電。在干燥的過(guò)程中需要避免樣品結(jié)構(gòu)的變形和損傷。
5.金屬鍍膜:由于掃描電子顯微鏡的探針需要樣品表面導(dǎo)電才能得到清晰的圖像,因此需要對(duì)樣品進(jìn)行金屬鍍膜。常用的金屬有金、銀、銅、鉑、鎢等。鍍膜厚度一般在20~30nm之間。
需要注意的是,生物樣品制備過(guò)程中需要避免過(guò)度處理、過(guò)度曝光等,以免影響樣品的超微結(jié)構(gòu)。此外,樣品的制備方法也需要根據(jù)不同的研究目的進(jìn)行優(yōu)化,以獲得更好的研究效果。
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作者:澤攸科技