掃描電鏡能拍細(xì)胞么
日期:2024-07-09
掃描電子顯微鏡(SEM)可以拍攝細(xì)胞圖像,但需要進(jìn)行特殊的樣品制備步驟來保證細(xì)胞在高真空環(huán)境下的穩(wěn)定性和形態(tài)保真。以下是細(xì)胞樣品制備和成像的詳細(xì)步驟:
1. 樣品固定
目的:
固定細(xì)胞以保持其結(jié)構(gòu)和形態(tài)。
方法:
化學(xué)固定:常用的固定劑包括戊二醛(2.5-4%)和甲醛(2-4%),可以有效地固定細(xì)胞膜和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。將細(xì)胞培養(yǎng)物放入固定劑中,通常需要固定30分鐘到1小時(shí)。
用緩沖液(如磷酸鹽緩沖液PBS)反復(fù)沖洗,以去除多余的固定劑。
2. 脫水
目的:
去除細(xì)胞中的水分,避免在真空環(huán)境下蒸發(fā)。
方法:
梯度乙醇脫水:使用一系列逐漸增加濃度的乙醇溶液進(jìn)行脫水(30%、50%、70%、90%、100%)。每個(gè)濃度處理時(shí)間為10-15分鐘,在純乙醇中處理兩次,每次10-15分鐘。
3. 干燥
目的:
將細(xì)胞樣品完全干燥,避免在真空環(huán)境下產(chǎn)生形變。
方法:
臨界點(diǎn)干燥:使用臨界點(diǎn)干燥儀,通過二氧化碳臨界點(diǎn)干燥技術(shù)將樣品干燥,這是常用的方法。樣品在液態(tài)二氧化碳中處理,然后通過臨界點(diǎn)干燥將液態(tài)二氧化碳轉(zhuǎn)換為氣態(tài),避免液體表面張力導(dǎo)致的樣品形變。
4. 樣品涂層
目的:
提高樣品的導(dǎo)電性,防止充電效應(yīng),獲得更清晰的圖像。
方法:
金屬涂層:在樣品表面沉積一層導(dǎo)電材料(如金、鉑或碳)。使用濺射鍍膜儀或蒸發(fā)鍍膜儀進(jìn)行涂層,確保涂層均勻且厚度適中(通常在幾納米到幾十納米之間)。
5. 樣品安裝
目的:
將樣品固定在SEM的樣品臺上,確保穩(wěn)定成像。
方法:
導(dǎo)電膠固定:使用導(dǎo)電膠或碳膠帶將樣品固定在樣品臺上,確保接觸良好。樣品臺需清潔,樣品應(yīng)牢固固定,避免成像過程中移動。
6. 成像
目的:
使用SEM進(jìn)行細(xì)胞成像。
方法:
調(diào)整顯微鏡設(shè)置:
選擇適當(dāng)?shù)募铀匐妷海ㄍǔT?-20 kV范圍內(nèi),具體取決于樣品和成像需求)。
設(shè)置合適的探針電流和孔徑,確保獲得清晰圖像。
使用低真空模式(如果可用)減少樣品充電效應(yīng)。
優(yōu)化成像參數(shù):
逐步調(diào)整對焦和像散校正,使圖像達(dá)到適合的清晰度。
使用不同的檢測器(如二次電子檢測器和背散射電子檢測器)獲得不同信息的圖像。
注意事項(xiàng)
樣品處理過程需小心:避免在各個(gè)步驟中損壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),尤其是在固定和干燥過程中。
環(huán)境控制:樣品制備過程在干凈、無塵的環(huán)境中進(jìn)行,避免污染。
操作人員需熟練:樣品制備和SEM操作需要一定的專業(yè)知識和經(jīng)驗(yàn),確保獲得高質(zhì)量的圖像。
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作者:澤攸科技