在臺式掃描電鏡（SEM）中進行生物樣品的冷凍切片觀察是一種常見的方法，可以保留生物樣品的原始結(jié)構和形態(tài)。以下是實現(xiàn)這一過程的步驟和技術：

1. 樣品準備

1.1 樣品固定

化學固定：使用固定劑（如戊二醛和滲透劑）對生物樣品進行固定，以保持其結(jié)構完整。

冷凍固定：快速冷凍樣品，通常使用液氮進行冷凍，以防止冰晶形成并損傷樣品結(jié)構。

1.2 樣品冷凍和包埋

冷凍介質(zhì)：將樣品浸入冷凍介質(zhì)（如蔗糖、乙二醇或乙二醇-甘油混合物）中進行冷凍保護。

包埋介質(zhì)：將樣品包埋在冷凍包埋介質(zhì)中，如OCT（Optimal Cutting Temperature）化合物。

2. 樣品切片

2.1 冷凍切片機（Cryo-Ultramicrotome）

樣品安裝：將包埋后的樣品安裝在冷凍切片機的樣品臺上。

切片操作：使用冷凍切片機在低溫環(huán)境下對樣品進行超薄切片，通常切片厚度在50-100納米之間。

3. 樣品轉(zhuǎn)移和處理

3.1 轉(zhuǎn)移到載玻片

冷凍轉(zhuǎn)移：將切片轉(zhuǎn)移到預冷的載玻片上，確保樣品保持在低溫狀態(tài)下，以防止樣品變性。

3.2 樣品干燥

冷凍干燥：在低溫和真空環(huán)境下進行冷凍干燥，去除樣品中的冰，以防止在觀察過程中樣品變形。

4. 樣品涂覆

4.1 導電涂層

金屬涂層：使用金屬噴鍍或濺射設備，在樣品表面涂覆一層導電金屬（如金、鉑或鉻），以減少電子束對樣品的充電效應。

5. 樣品觀察

5.1 裝載樣品

安裝樣品：將處理后的樣品安裝在SEM的樣品臺上，確保樣品穩(wěn)定。

5.2 SEM設置

低溫樣品臺：使用低溫樣品臺，保持樣品在低溫環(huán)境下進行觀察，通常在液氮溫度（-196°C）下操作。

低加速電壓：選擇適當?shù)募铀匐妷海ǔ］^低的電壓（如1-5 kV）可以減少樣品損傷和充電效應。

5.3 圖像采集

掃描參數(shù)調(diào)整：根據(jù)樣品特性和成像需求，調(diào)整SEM的掃描參數(shù)（如電子束強度、掃描速度、工作距離等），以獲得清晰的圖像。

圖像采集和處理：使用SEM軟件進行圖像采集和處理，獲得高分辨率的樣品表面結(jié)構圖像。

6. 數(shù)據(jù)分析和保存

圖像分析：對采集到的圖像進行分析，提取所需信息。

結(jié)果保存：將圖像和數(shù)據(jù)保存為適當?shù)奈募袷剑糜谶M一步研究和報告。

以上就是澤攸科技小編分享的如何在臺式掃描電鏡中進行生物樣品的冷凍切片觀察的介紹。更多掃描電鏡產(chǎn)品及價格請咨詢15756003283(微信同號)。